해양샘플의 독특한 컬렉현은 유기체를 대상으로하고 최근의 발전 덕분에 게놈분석을 위해 광범위한 시퀀싱이 수행되었습니다. 다양한 접근법은 기반으로 핵산 추출에서 생산에 이르기까지 실험 절차와 분석을 용이하게하는데 도움이 될것입니다. 해양 생태계의 기능적 생물 다양성에 대한 연구는 독창적이고 혁신적이며 광범위한 범위의 데이터와 결합하여 진행되어왔습니다. 이러한 지난 10여년간의 급속한 발전은 유전자 및 생물 다양성을 해독하는 연구의 주역이 되었습니다. Tara Oceans기간동안 수집된 샘플들은 바이러스, 원핵 세포(박테리아 및 고세균)등의 독특한 샘플수집의 가치를 높이고 세포 유전체학의 의존하는 시퀀싱을 전자 분석으로 처리하였습니다. 진핵생물 및 원핵 생물을 각 샘플링 사이트의 분류학적 구성을 정의하는데 도움을 주었습니다. 또한 이러한 분석의 가장 중요한 결과중에 하나는 4천만개 이상의 유전자를 가진 해양 생물의 카탈로그를 확립하는데 사용되었습니다. Tara Oceans의 이러한 메타 데이터는 복잡하고 광활한 생태계의 논리를 풀어내는데에 있어서 큰 도움이 되어으며 추출부터 서열생산에 이르기까지 모든 품질관리 프로세스 및 생성된 데이터 세트에 대한 설몇 및 방법을 직접 연결할 수 있다는것이 가장 중요한 부분중에 하나입니다. 매스 컬렉션 샘플및 결과를 확보하고 바이러스를 제한하기 위한 우리의 방법은 NucleoSpin RNA Mini 스핀 컬럼에서 RNase에 추출된 RNA 양과 품질을 평가하였습니다. 이 방법으로 최종 RNA 샘플에서 미량 DNA의 존재를 배제하지는 못했고 Seq 라이브러리에 잔여 게놈 DNA의 위험을 줄이기 위해 PCR로 평가하여 모든 검사표본에서 처리가 효율적이라는것을 보여주었습니다. RNA 불리는 PBS 완충액으로 세척하여 RNA를 제거하고 유리컵과 여과 시스템을 통과시켰습니다. 상충액을 혼합물로 2개로 나누고 전체 볼륨을 단일 열에 배치하는것이 아니라 RNA를 형광 미터로 정량화하여 DNase처리를 수행하였습니다. 대체 프로토콜이 멤브레인을 여러개의 작은 조각으로 잘라 원생 생물 및 후생 동물이 적용한 동일한 철차에 따라 계속 추출을 시행하였고, 추출 후 두번째 분량을 저장하였습니다. 이 프로토콜은 바이러스 함유 침전물을 재현하고 DNase를 처리하여 해양 바이러스 생태학 및 유전체학 연구의 적용할 수 있습니다. 간단히, 회수된 바이러스를 정지시키기위해 Wizard Prep DNA Purification 시스템을 사용하여 DNA를 추출하였습니다. 또한 이름별로 문서화시키고 모든 세부 프로토콜은 이름별로 확인 할 수 있습니다. 단일 증폭 게놈(SAGs)는 SYBR Green I를 사용하여 염색하였고 각각의 PCR을 위한 분취량을 사용하여 증폭된 DNA를 추출하여 WGA에 의해 증폭된 DNA를 백업하는데 사용하였습니다. 광범위한 분류학 및 생태학적 측면에서 이 두가지는 다음과 같은 장점을 제공합니다. 광범위한 데이터를 모든 알려진 계보중에 분류학적 할당을 허용합니다. PCR혼합물은 a반응의 고원단계동안 샘플 내 편차를 원활하게하기위해 정제된 amplicons의 aliquots는 더 큰 DNA 단편을 상층액으로 보관하고 Qubit형광 측정기로 정량화했습니다. 추출된 DNA 수율에 따라 약 180bp의 삽입 단편에 반응하여 Agilent Biolanalyzer DNA High Sensitivity칩에서 시각화하고 NEBNext DNA Sample Prep Master Mix Set응 사용하요 제품을 청소했습니다. 이어 샘플은 첫번쨰 정화에서 사용된 동일한 표본에서 적합한 농도로 수행하고 더 높은 샘플의 경우 Kapa Hifi HotStart NGS라이브로리 증폭키트를 사용하여 증폭하였습니다. 결과적으로 Tara Oceans Polar Circle 캠페인에서의 수집된 샘플든 해양샘플의 큰 이익과 발전을 가져왔습니다.
